双标记胚胎干细胞可纯化肝祖细胞
近日，卫生部北京医院普外科，第二军医大学细胞生物研究室，中科院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所的研究人员共同发表论文，旨在建立白蛋白（Alb）和角蛋白19（CK19）双标记的胚胎干细胞系，并探讨其在肝祖细胞分化中的应用。研究指出，双标记胚胎干细胞的建立可以纯化和定量肝祖细胞，便于改进肝向诱导的方法及研究肝祖细胞特性。该文发表在2012年第20卷第1期《中华肝脏病杂志》上。
近日，卫生部北京医院普外科，第二军医大学细胞生物研究室，中科院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所的研究人员共同发表论文，旨在建立白蛋白（Alb）和角蛋白19（CK19）双标记的胚胎干细胞系，并探讨其在肝祖细胞分化中的应用。研究指出，双标记胚胎干细胞的建立可以纯化和定量肝祖细胞，便于改进肝向诱导的方法及研究肝祖细胞特性。该文发表在2012年第20卷第1期《中华肝脏病杂志》上。
构建含有Alb启动子的绿色荧光蛋白载体，并带有新霉素抗性，同时构建由CK19启动子启动红色荧光的载体，带有潮霉素抗性；将构建好的载体线性化后，同时电转胚胎干细胞El4.1，利用新霉素和潮霉素双筛选后，建立双标记基因修饰胚胎干细胞系El4.1-2；通过拟胚体形成及生长因子（骨形态发生蛋白4和碱性成纤维细胞生长因子）刺激的方法诱导产生肝祖细胞，经过流式细胞术和逆转录——聚合酶链反应检测诱导效率。
结果构建了含有Alb启动子启动绿色荧光和CK19启动子启动红色荧光的载体，并证明了Alb和CK19启动子能特异启动各自蛋白的表达；建立了Alb和CK19双标记胚胎细胞系，并证明其具有多能性，显著表达多能性基因八聚体结合转录因子4和阶段特异性胚胎抗原1，在El4.1-2诱导分化22d后通过流式细胞术分选成功得到21.27% Alb和CK19双阳性的肝祖细胞。
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