基于舌鳞癌Tca8113细胞醛脱氢酶活性不同构建差异表达基因cDNA文库
近日，重庆医科大学附属 医院颌面外科研究人员发表论文，旨在构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性（high/low aldehyde dehydrogenase activity，ALDHhigh/ALDHlow）细胞差异表达基因cDNA文库。研究指出，成功构建ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA文库。该文发表在2012年第03期《第三军医大学学报》杂志上。
近日，重庆医科大学附属 医院颌面外科研究人员发表论文，旨在构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性（high/low aldehyde dehydrogenase activity，ALDHhigh/ALDHlow）细胞差异表达基因cDNA文库。研究指出，成功构建ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA文库。该文发表在2012年第03期《第三军医大学学报》杂志上。
用流式细胞仪检测ALDEFLUOR染色的Tca8113细胞中干细胞标志物ALDH的表达，并收集ALDHhigh和ALDHlow细胞；用Trizol分别提取两亚群细胞的总RNA；用抑制性消减杂交（SSH）对2组RNA进行差异基因筛选和扩增，扩增产物与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5α。文库扩增后，每库随机挑取24克隆进行酶切、测序及同源性分析。
分选得到ALDHhigh和ALDHlow两亚群细胞，其中ALDHhigh细胞的比例为2.5%；分光光度计测得ALDHhigh和ALDHlow的RNA D（260）/D（280）的比值分别为1.93和1.92；构建了ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA双向文库，每个库约500个克隆菌落，每库随机挑选24个菌落进行PCR分析，克隆片段均匀分布在200～700 bp，无假阳性克隆。测序结果经同源性比对分析和PubMed检索，其中与肿瘤有关的基因有SLC25A13、KLHL2、NPC1、WAPL、BARD1、Notch2、EEF2K。
相关文章
评论
我要跟帖
