RNA干扰PDK-1对5-FU诱导结肠癌细胞凋亡的促进作用
近日，第三军医大学西南医院肿瘤科研究人员发表论文，旨在探讨以丙酮酸脱氢酶激酶-1（pyruvate dehydrogenase kinase isozyme 1，PDK-1）为靶标的短发夹RNA（shRNA）与化疗药5-氟尿嘧啶（5-FU）联合应用对人结肠癌LS174T细胞的促凋亡作用。研究指出，PDK-1 shRNA能特异性下调LS174T细胞中PDK-1的表达，PDK-1干扰联合5-FU可促进结肠癌细胞化疗诱导凋亡。该文发表在2012年第01期《第
近日，第三军医大学西南医院肿瘤科研究人员发表论文，旨在探讨以丙酮酸脱氢酶激酶-1（pyruvate dehydrogenase kinase isozyme 1，PDK-1）为靶标的短发夹RNA（shRNA）与化疗药5-氟尿嘧啶（5-FU）联合应用对人结肠癌LS174T细胞的促凋亡作用。研究指出，PDK-1 shRNA能特异性下调LS174T细胞中PDK-1的表达，PDK-1干扰联合5-FU可促进结肠癌细胞化疗诱导凋亡。该文发表在2012年第01期《第三军医大学学报》杂志上。
针对PDK-1序列设计3段干扰序列及1个阴性对照，分别构建pGenesil.1-PDK-1重组质粒表达载体及pGenesil.1-NC阴性对照载体，利用脂质体分别将质粒转染入LS174T，并用G418对细胞进行药物筛选，并通过Real-time PCR和Western blot检测有干扰序列的有效性。MTT实验检测5-FU对干扰组和对照组细胞生长、增殖的影响，流式细胞仪检测细胞凋亡率。
Real-time PCR和Western blot证实3个干扰组均抑制PDK-1表达，其中最大敲减效率超过70%。MTT实验结果显示，经5-FU同样处理48 h后，PDK-1干扰的LS174T细胞生长抑制率较对照组显著增高（P<0.05）；流式细胞仪结果显示，干扰组细胞凋亡率较对照组增高（P<0.05）。
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