近日，浙江大学医学院附属邵逸夫医院普外科研究人员发表论文，旨在构建抗HIF-1α单靶位（anti-H）、抗Survivin单靶位（anti-S）以及抗HIF-1α和Survivin基因双靶位微小RNA表达载体（anti-H+S），观察和比较这3种载体对胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响。研究指出，本研究成功构建了抗HIF-1α和Survivin的单靶位质粒和双靶位质粒；其中，anti-H+S抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖作用强于anti-H（Ⅰ）和anti-S（Ⅱ）。该文发表在2012年第01期《浙江大学学报(医学版) 》杂志上。

　　设计4组靶向HIF-1α和Survivin基因的寡核苷酸序列，连接至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR质粒，构建两组共8个载体，依次为anti-H（Ⅰ）、anti-H（Ⅱ）、anti-H（Ⅲ）、anti-H（Ⅳ）和anti-S（Ⅰ）、anti-S（Ⅱ）、anti-S（Ⅲ）、anti-S（Ⅳ）。实时定量RT-PCR检测靶基因mRNA的表达水平，将两组中mRNA下调作用最强的质粒串联，构建anti-H+S。用anti-H+S及mRNA下调作用最强的anti-H和anti-S转染胰腺癌Panc-1细胞，Western blot测定靶蛋白表达情况，MTT法检测细胞增殖活性。

　　经测序鉴定，所有anti-H、anti-S及双靶位质粒anti-H+S装载位点核苷酸序列与设计序列完全相符。anti-H的靶基因mRNA沉默效率依次为48%、2%、44%和30%；anti-S的靶基因mRNA沉默效率依次为72%、75%、58%和59%。由anti-H（Ⅰ）和anti-S（Ⅱ）串联得到双靶位质粒anti-H+S。anti-H+S的靶基因mRNA沉默效率为53%（HIF-1α）和42%（survivin）。anti-H（Ⅰ）、anti-S（Ⅱ）及anti-H+S与对照质粒相比均使靶基因蛋白的表达明显下降，细胞增殖受到明显抑制（P<0.05）。其中anti-H+S对细胞的增殖抑制作用强于anti-H（Ⅰ）和anti-S（Ⅱ），72h后差异有统计学意义（P<0.05）。

　　相关链接：http://www.journals.zju.edu.cn/med/CN/volumn/home.shtml