视锥视杆细胞同源盒基因的慢病毒载体的构建
日前，济宁市第一人民医院眼科、中南大学湘雅二医院眼科、中南大学人类生殖与干细胞工程研究所和湖南省郴州市第一人民医院眼科的研究人员共同发表论文，旨在构建视紫红质启动子(rhodopsin，Rho)驱动的、大鼠视锥视杆细胞同源盒基因(cone-rod homeobox gene，CRX)为目的基因的重组慢病毒载体LV-Rho-EGFP/CRX，研究其在体外的转染效率。研究指出重组载体LV-Rho-EGFP/CRX产生的慢病毒能感染光感受器细胞来源的HXO-RB44细胞，但还需提高转染的
日前，济宁市第一人民医院眼科、中南大学湘雅二医院眼科、中南大学人类生殖与干细胞工程研究所和湖南省郴州市第一人民医院眼科的研究人员共同发表论文，旨在构建视紫红质启动子(rhodopsin，Rho)驱动的、大鼠视锥视杆细胞同源盒基因(cone-rod homeobox gene，CRX)为目的基因的重组慢病毒载体LV-Rho-EGFP/CRX，研究其在体外的转染效率。研究指出重组载体LV-Rho-EGFP/CRX产生的慢病毒能感染光感受器细胞来源的HXO-RB44细胞，但还需提高转染的效率和滴度。该文章发表在2012年06卷15期的《中华临床医师杂志》上。
用PCR法扩增质粒pEGFP-C3/CRX中的EGFP/CRX基因片段，取代慢病毒载体LV-Rho-EGFP中的EGFP片段，构建表达载体LV-Rho-EGFP/CRX，经酶切和双向测序验证。用磷酸钙沉淀法四质粒共转染293T细胞，包装、收集病毒，利用有限稀释法测定病毒滴度。用慢病毒原液感染光感受器细胞来源的人视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44，观察感染情况。
成功构建慢病毒表达载体LV-Rho-EGFP/CRX，产生的慢病毒滴度为2×104 IU/ml，感染48h后，HXO-RB44细胞内可见强弱不等的绿色荧光。
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