慢病毒介导的稳定过表达人谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基基因的WRL68细胞株构建
近期，广西医科大学公共卫生学院环境卫生学教研室研究人员发表论文，旨在利用慢病毒载体构建稳定过表达人谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基（GCLC）的WRL68细胞株。研究指出，成功构建了稳定过表达人GCLC的WRL68细胞株。该文发表在2015年第10期《环境与健康杂志》上。 采用PCR方法合成GCLC基因全长，经NotI、NsiI酶切后克隆到慢病毒载体LV6上；采用PCR、酶切、测序鉴定重组质
近期，广西医科大学公共卫生学院环境卫生学教研室研究人员发表论文，旨在利用慢病毒载体构建稳定过表达人谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基（GCLC）的WRL68细胞株。研究指出，成功构建了稳定过表达人GCLC的WRL68细胞株。该文发表在2015年第10期《环境与健康杂志》上。
采用PCR方法合成GCLC基因全长，经Not I、Nsi I酶切后克隆到慢病毒载体LV6上；采用PCR、酶切、测序鉴定重组质粒LV6-GCLC；将重组质粒转染293T细胞，收集培养上清并感染WRL68细胞，经嘌呤霉素筛选出稳定过表达细胞株。采用增强型绿色荧光蛋白检测转染情况，采用Real-time PCR及Western blotting鉴定所构建的细胞株；MTT法检测细胞活性；采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测细胞谷胱甘肽（GSH）含量。
结果显示， PCR、酶切及测序结果表明重组慢病毒载体构建成功；重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光及蛋白表达，包装过表达慢病毒并检测其浓缩滴度为1.0×109 TU/ml；用1μg/ml嘌呤霉素成功筛选出稳定过表达细胞株；GCLC过表达组中GCLC的m RNA和蛋白的表达量高于空载体转染组及对照组（P<0.05）；GCLC过表达组、空载体转染组及对照组的细胞活性间比较，差异无统计学意义（P>0.05）；GCLC过表达组GSH含量明显高于空载体转染组及对照组（P<0.05）。
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