人三叶因子3 shRNA表达质粒的构建及有效序列筛选
近期，河北北方学院组胚教研室研究人员发表论文，旨在三叶因子3（trefoilfactor3，TFF3）除具有黏膜保护作用外还与恶性肿瘤的形成、生长、转移有关。本研究通过慢病毒表达质粒介导shRNA，瞬时转染自身表达TFF3的甲状腺乳头状癌K1细胞，筛选出了靶向人TFF3的最有效的siRNA序列。研究指出，成功构建了pLVX-shRNA-puro-TFF3慢病毒质粒，并筛选出了最有效的序列，为
近期，河北北方学院组胚教研室研究人员发表论文，旨在三叶因子3（trefoil factor 3，TFF3）除具有黏膜保护作用外还与恶性肿瘤的形成、生长、转移有关。本研究通过慢病毒表达质粒介导shRNA，瞬时转染自身表达TFF3的甲状腺乳头状癌K1细胞，筛选出了靶向人TFF3的最有效的siRNA序列。研究指出，成功构建了pLVX-shRNA-puro-TFF3慢病毒质粒，并筛选出了最有效的序列，为进一步研究TFF3的功能奠定了基础。该文发表在2016年第02期《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》上。
分别在人TFF3基因mRNA的132、170、258和537bp处作为潜在靶位点，合成4条siRNA转录模板的发夹结构（shRNA1～4）以及1条阴性对照（shRNAC），体外退火后插入pLVX-shRNA-puro构建重组质粒，酶切鉴定，并测序。瞬时转染K1细胞、Real-time PCR及western-blot等检测TFF3mRNA和蛋白在转染细胞的表达。
shRNA 1～2两条发夹结构序列有基因突变，shRNA 3～4对K1细胞TFF3表达有不同程度的抑制效应（P<0.01）。其中shRNA3（TFF3 258～276）表现出了最高的沉默效率（转染效率76.83%时，mRNA水平的沉默效率达60.67%；蛋白质水平的沉默效率达56.44%，均P<0.01）。
相关链接：http://med.wanfangdata.com.cn/Journal/lcebyhkzz.aspx
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