小鼠S1PR3慢病毒表达载体的构建及表达
作者：杨艳辉 整理 来源： 日期：2016-04-12
导读
近期，广州军区武汉总医院干部病房二科研究人员发表论文，旨在构建小鼠1-磷酸鞘氨醇受体3（S1PR3）慢病毒表达载体，并检测其表达情况。研究指出，本研究成功构建了可以高表达S1PR3的pLenti6.3-S1PR3-IRES-EGFP慢病毒表达载体，为进一步调控S1PR3相关的细胞功能奠定了基础。该文发表在2015年第17期《海南医学》杂志上。 小鼠心肌组织mRNA并逆转录得到cDNA，设
近期，广州军区武汉总医院干部病房二科研究人员发表论文，旨在构建小鼠1-磷酸鞘氨醇受体3（S1PR3）慢病毒表达载体，并检测其表达情况。研究指出，本研究成功构建了可以高表达S1PR3的p Lenti6.3-S1PR3-IRES-EGFP慢病毒表达载体，为进一步调控S1PR3相关的细胞功能奠定了基础。该文发表在2015年第17期《海南医学》杂志上。
小鼠心肌组织m RNA并逆转录得到c DNA，设计并合成引物，采用亚克隆方式将目的基因克隆至慢病毒表达载体p Lent-IRES-EGFP中，将表达载体与包装质粒共转293T细胞，进行目的基因的过表达慢病毒包装，随后收集培养成功病毒，使用病毒感染小鼠L929细胞，检测感染后L929细胞表达S1PR3情况。
从小鼠心机组织c DNA中扩增出大小约1 100 bp的目的片段；双酶切后成功将S1PR3克隆到慢病毒表达载体p Lent-IRES-EGFP，表达质粒与包装质粒供转染293细胞后48 h就可以看到细胞中成功表达绿色荧光。收集培养成功病毒感染小鼠L929细胞，成功表达出S1PR3。
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