酵母双杂交技术筛选杜氏盐藻cDNA文库中与S-腺苷高半胱氨酸水解酶相互作用的蛋白
作者：杨俊岭 整理 来源： 日期：2016-04-05
导读
近期，郑州大学生命科学学院研究人员发表论文，旨在应用酵母双杂交技术筛选杜氏盐藻cDNA文库中能与S-腺苷高半胱氨酸水解酶（dsSAHH）相互作用的蛋白。研究指出，dsRACK1是dsSAHH的相互作用蛋白。该文发表在2016年第01期《郑州大学学报（医学版）》杂志上。 将构建好的pGBKT7-dsSAHH诱饵载体转化至酵母细胞Y187，与转化有杜氏盐藻cDNA文库的酵母细胞AH109杂交
近期，郑州大学生命科学学院研究人员发表论文，旨在应用酵母双杂交技术筛选杜氏盐藻c DNA文库中能与S-腺苷高半胱氨酸水解酶（ds SAHH）相互作用的蛋白。研究指出，dsRACK1是ds SAHH的相互作用蛋白。该文发表在2016年第01期《郑州大学学报（医学版）》杂志上。
将构建好的p GBKT7-ds SAHH诱饵载体转化至酵母细胞Y187，与转化有杜氏盐藻c DNA文库的酵母细胞AH109杂交，从杜氏盐藻c DNA文库中筛选出能与ds SAHH相互作用的蛋白质。扩增所得基因片段全长，并在原核内表达该融合蛋白。随后采用Far-western blot、His pull-down及免疫共沉淀方法验证ds SAHH与目的蛋白在体内、外的相互作用。
以ds SAHH为诱饵筛选出3个阳性克隆，扩增得到dsRACK1、ds Met AP1和dse EF1α3个新基因。His pull-down和免疫共沉淀体内外实验证实dsRACK1能与ds SAHH相互作用。
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