慢病毒转染稳定表达GFP融合自噬蛋白LC3大鼠H9c2心肌细胞系的建立
作者：杨艳辉 整理 来源： 日期：2016-04-01
导读
近期，武汉大学人民医院麻醉科研究人员发表论文，旨在建立稳定表达绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3（GFP-LC3）的大鼠心肌细胞H9c2细胞系。研究指出，用MSCV-GFP-LC3转染的H9c2细胞经G418筛选，可成功建立GFP-LC3稳定表达系，从而为后续功能实验提供有用的细胞研究模型。该文发表在2016年第02期《临床和实验医学杂志》上。 构建MSCV-GFP-LC3表达载体，应用
近期，武汉大学人民医院麻醉科研究人员发表论文，旨在建立稳定表达绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3（GFP-LC3）的大鼠心肌细胞H9c2细胞系。研究指出，用MSCV-GFP-LC3转染的H9c2细胞经G418筛选，可成功建立GFP-LC3稳定表达系，从而为后续功能实验提供有用的细胞研究模型。该文发表在2016年第02期《临床和实验医学杂志》上。
构建MSCV-GFP-LC3表达载体，应用转染技术将该质粒导入H9c2细胞，用G418筛选稳定表达的细胞系。载体细胞与心肌细胞中GFP-LC3的表达分别用荧光显微镜与共聚焦显微镜及Western blot方法检测，并利用该稳定表达细胞系观察应激时细胞发生自噬的情况。
成功获得一株转染并经G418反复筛选的H9c2细胞系，在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光表达率在95%以上，Western blot结果证实了GFP-LC3融合蛋白的表达。激光共聚焦显微镜证明给予自噬诱导剂Rapamycin可诱导自噬的发生。
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