甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子筛选方法的建立
作者：杨俊岭 整理 来源： 日期：2016-03-25
导读
近期，昆明学院医学院临床检验教研室研究人员发表论文，旨在通过构建pCAT3启动子陷阱载体筛选甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子。研究指出，该启动子文库可有效筛选噬菌体LSPA1启动子，为进一步深入研究噬菌体LSPA1提供帮助。该文发表在2015年第06期《郑州大学学报（医学版）》杂志上。 PCR无义突变去除pCAT2载体骨架上CalⅠ酶切位点，并在CAT片段的5端引入CalⅠ的酶切位
近期，昆明学院医学院临床检验教研室研究人员发表论文，旨在通过构建p CAT3启动子陷阱载体筛选甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子。研究指出，该启动子文库可有效筛选噬菌体LSPA1启动子，为进一步深入研究噬菌体LSPA1提供帮助。该文发表在2015年第06期《郑州大学学报（医学版）》杂志上。
PCR无义突变去除p CAT2载体骨架上CalⅠ酶切位点，并在CAT片段的5’端引入CalⅠ的酶切位点，构建启动子陷阱载体p CAT3。TaqⅠ酶切噬菌体LSPA1基因组，插入p CAT3载体中，转化至大肠杆菌DH5α，通过氯霉素抗性平板筛选获得噬菌体LSPA1基因文库菌；随机挑取1株提取质粒，测序及比对分析插入序列；根据分析结果设计引物，扩增可能的启动子序列，并插入验证载体p-3lysm-egfp，转化DH5α，荧光显微镜观察。
成功构建p CAT3启动子陷阱载体，获得约100启动子文库菌，其中1株文库菌质粒中随机插入片段可能对应噬菌体LSPA1的ORF4启动子；插入待验证DNA片段的p-3lysm-egfp载体重组菌在荧光显微镜下能见到明显绿色荧光。
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