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狂犬病病毒糖蛋白膜外区重组基因的表达与鉴定

作者：杨俊岭整理来源：日期：2016-03-24

导读

　　近期，潍坊医学院医学检验学系研究人员发表论文，旨在构建狂犬病病毒糖蛋白外膜区基因质粒并在大肠埃希菌中表达，为研制狂犬病病毒抗原诊断试剂盒奠定基础。方法采用RT-PCR研究指出，成功表达了狂犬病病毒糖蛋白膜外区蛋白，该蛋白反应原性良好，为研制狂犬病病毒抗原诊断试剂盒奠定了基础。该文发表在2015年第08期《中国病原生物学杂志》上。　　扩增狂犬病病毒CTN株糖蛋白膜外区基因，目的片段与表达载体

　　扩增狂犬病病毒CTN株糖蛋白膜外区基因，目的片段与表达载体PET32a（+）分别经双酶切、胶回收后连接并转化至E.coli BL21（DE3）菌株。阳性重组菌经IPTG诱导表达，表达产物用SDS-PAGE分析后进行纯化，利用Western blot鉴定其反应原性。

　　结果显示，以狂犬病病毒CTN株为模板扩增的糖蛋白膜外区基因片段经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定大小为1 323bp，与理论值相符；重组质粒经酶切鉴定后转化入E.coli BL21（DE3），经IPTG诱导表达的融合蛋白分子质量单位大小约为66.6ku，与理论值相符；重组菌在IPTG终浓度为1mmol/L，诱导时间为4h，温度为37℃时蛋白表达产量最高。该融合蛋白主要以包涵体形式存在，可被His标签抗体识别。