三价砷甲基转移酶基因在UROtsa细胞系的转导及表达研究
近期，广东省职业病防治院毒理实验所研究人员发表论文，旨在构建人源三价砷甲基转移酶（AS3MT）的基因逆转录病毒表达载体，转导UROtsa细胞，建立稳定表达的细胞系。研究指出，成功构建能高水平稳定表达AS3MT基因的UROtsa细胞系，为研究AS3MT在砷的代谢、毒性和致癌性中的作用机制奠定基础。该文发表在2015年第04期《中国职业医学》杂志上。 采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）
近期，广东省职业病防治院毒理实验所研究人员发表论文，旨在构建人源三价砷甲基转移酶（AS3MT）的基因逆转录病毒表达载体，转导UROtsa细胞，建立稳定表达的细胞系。研究指出，成功构建能高水平稳定表达AS3MT基因的UROtsa细胞系，为研究AS3MT在砷的代谢、毒性和致癌性中的作用机制奠定基础。该文发表在2015年第04期《中国职业医学》杂志上。
采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR），从人源HEK293细胞基因库中扩增出AS3MT基因，将AS3MT基因克隆到逆转录病毒表达载体pRetro X-IRES-Zs Green1中，经病毒包装后，转导UROtsa细胞，荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达，采用流式细胞仪筛选阳性克隆，半定量RT-PCR法检测AS3MT mRNA表达水平，免疫印迹法检测AS3MT蛋白表达水平。
结果显示， 经RT-PCR扩增AS3MT基因、限制性双酶切及基因测序鉴定，证实AS3MT基因正确插入逆转录病毒表达载体。以该载体转染病毒包装细胞Retro Pack PT67后获得的病毒液滴度>106cfu/m L。将病毒转导UROtsa细胞，转导效率达50.00%。经3次流式细胞分选仪筛选，获得成功转染并稳定表达GFP的URO-Retro X-AS3MT细胞株；半定量RT-PCR和免疫印迹检测结果均表明所转导的AS3MT基因在UROtsa细胞中成功表达。
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