首页>>登录,我要注册

基础医学

构建携带人/鼠IFN-γ重组腺病毒体外转染人脐带间充质干细胞的实验研究

作者:杨艳辉 整理 来源: 日期:2016-03-09
导读

  近期,四川大学华西医院血液科研究人员发表论文,旨在构建人/鼠干扰素(IFN-)的重组腺病毒,体外转染人脐带间充质干细胞(humanumbilicalmesenchymalstemcells,HUMSCs),为研究IFN-在预防和治疗移植物抗宿主病(graft-versus-hostdisease,GVHD)中的作用提供实验依据。研究指出,成功构建了携带人/鼠IFN-基因的重组腺病毒载体,并证

  近期,四川大学华西医院血液科研究人员发表论文,旨在构建人/鼠干扰素(IFN-γ)的重组腺病毒,体外转染脐带间充质干细胞(human umbilical mesenchymal stem cells,HUMSCs),为研究IFN-γ在预防和治疗移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)中的作用提供实验依据。研究指出,成功构建了携带人/鼠IFN-γ基因的重组腺病毒载体,并证实其可有效转染HUMSCs。该文发表在2015年第06期《四川大学学报(医学版)》杂志上。

  采用PCR法从含有人/鼠IFN-γ基因的质粒中扩增出目的基因片段IFN-γ,然后定向克隆到穿梭质粒载体pDC316中,构建pDC316-IFN-γ,经酶切、PCR及测序鉴定后,再将IFN-γ定向克隆至腺病毒骨架载体,从而构建携带IFN-γ的重组腺病毒载体,并转染人胚肾细胞系293细胞,进行重组腺病毒(Ad-IFN-γ)的包装、生产和纯化;用半数组织培养感染量(50%tissue culture infective dose,TCID50)法检测重组腺病毒滴度。将Ad-IFN-γ及空病毒(Ad-null,作为载体阴性对照)分别转染HUMSCs,在荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用Western blot与ELISA法鉴定IFN-γ蛋白的表达。

  成功构建了携带IFN-γ的重组腺病毒,鼠IFN-γ(Ad-mIFN-γ)的滴度为1.0×1010 IU/mL,人IFN-γ(Ad-hIFN-γ)的滴度为1.6×1010 IU/mL,Ad-GFP的滴度为1.0×109 IU/mL。Ad-IFN-γ转染HUMSCs后24h开始观察到绿色荧光,72h时该荧光表达更强;Western blot和ELISA法均证实HUMSCs表达IFN-γ蛋白。

   相关链接:http://med.wanfangdata.com.cn/Journal/hxykdxxb.aspx

分享:

评论

我要跟帖
发表
回复 小鸭梨
发表
//站内统计//百度统计//谷歌统计//站长统计
*我要反馈: 姓 名: 邮 箱:
Baidu
map