肝刺激因子稳定转染人肝癌细胞系的方法建立与表达鉴定
作者：杨艳辉 整理 来源： 日期：2016-02-23
导读
近期，首都医科大学基础医学院细胞生物学系肝脏保护与再生调节北京市重点实验室研究人员发表论文，旨在建立稳定表达肝刺激因子（hepaticstimulatorsubstance，HSS）的BEL-7402肝癌细胞系，并对其生物学特性进行鉴定。研究指出，目前已成功构建稳定转染HSS的BEL-7402肝癌细胞系。为深入研究HSS的生理功能提供实验工具和研究基础。该文发表在2015年第06期《首都医科
近期，首都医科大学基础医学院细胞生物学系肝脏保护与再生调节北京市重点实验室研究人员发表论文，旨在建立稳定表达肝刺激因子（hepatic stimulator substance，HSS）的BEL-7402肝癌细胞系，并对其生物学特性进行鉴定。研究指出，目前已成功构建稳定转染HSS的BEL-7402肝癌细胞系。为深入研究HSS的生理功能提供实验工具和研究基础。该文发表在2015年第06期《首都医科大学学报》杂志上。
采用脂质体法将鉴定后的Flag-HSS-pc DNA3.0质粒转染到肝癌细胞系BEL-7402中，进行G418筛选，获得稳定转染的人肝癌细胞系。通过real-time PCR、Western blotting和免疫荧光染色等方法鉴定HSS mRNA和蛋白质表达及亚细胞定位。
免疫荧光染色实验证实HSS基因能在稳定转染的肝癌细胞系中表达，并定位于线粒体中。同时发现在稳定转染细胞中HSS mRNA和蛋白质的表达也均高于野生型BEL-7402细胞。
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