日前,济南市第二人民医院眼科、济南市眼科医院和温州医学院附属眼视光医院的研究人员共同发表文章,旨在研究EGF对体外氧化损伤的人眼Müller细胞增生和迁移的影响及其作用机制。研究表明,EGF对体外培养的Müller细胞具有促进增生及迁移的作用,10 mg/L EGF促进Müller细胞迁移作用最强。100 mg/L外源性EGF抗Müller细胞氧化损伤作用最强,其作用机制是激活Akt信号传导通路。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012年第30卷08期。
日前,济南市第二人民医院眼科、济南市眼科医院和温州医学院附属眼视光医院的研究人员共同发表文章,旨在研究EGF对体外氧化损伤的人眼Müller细胞增生和迁移的影响及其作用机制。研究表明,EGF对体外培养的Müller细胞具有促进增生及迁移的作用,10 mg/L EGF促进Müller细胞迁移作用最强。100 mg/L外源性EGF抗Müller细胞氧化损伤作用最强,其作用机制是激活Akt信号传导通路。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012年第30卷08期。
该研究将人眼Müller细胞系MIO-M1细胞进行培养并用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、第Ⅷ因子、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、人角蛋白及S -1 00免疫组织化学法进行鉴定。在无血清DMEM中加入不同质量浓度(0、1、10、30、100 mg/L) EGF,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷( BrdU)标记法测定MIO-MI细胞的阳性率。根据干物方式的不同将培养细胞分为EGF组、H2O2损伤组、EGF+H2O2组、葡萄糖氧化酶(GO)组、GO+EGF组、EGF+ LY294002+H2 O2组,采用MTT比色法测定各组培养细胞的增生情况(A590)。对培养的人眼Müller细胞采用划痕实验观察H2O2损伤条件下0、1、10、30、100 mg/L EGF作用24、48、72 h后对Müller细胞增生、迁移的影响;采用Western blot技术检测EGF对体外不同培养条件下M üller细胞Akt信号传导通路的作用。
结果显示,正常培养条件下10、30、100 mg/L EGF作用后Müller细胞的增生率分别为28.0%、32.9%、39.0%,明显高于0 mg/L、1 mg/L EGF组(24.5%、26.2%)。在H2O2和GO分别培养细胞的条件下,高质量浓度的EGF组Müller细胞的吸光度(A570)值明显大于低质量浓度组,各组总体差异有统计学意义(F=23.582,P=0.000)。与EGF+H2O2组比较,EGF+ LY294002+H2O2组Müller细胞的吸光度(A570)值明显下降。10 mg/L EGF促进Müller细胞迁移的作用最强。0.08 mmol/LH2O2作用Müller细胞后Akt信号通路激活,提前2h加入外源性EGF后,100 mg/L EGF对抗氧化所致Müller细胞的损伤作用最明显,同时提前2h加入外源性EGF和Akt信号通路阻断剂LY294002后,Akt信号传导通路的保护作用减弱。
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