细粒棘球绦虫丙酮酸脱氢酶的重组表达及生物信息学分析
作者：杨俊岭 整理 来源： 日期：2016-01-19
导读
近期，内蒙古民族大学蒙医药学院研究人员发表论文，旨在克隆表达细粒棘球绦虫丙酮酸脱氢酶（EgPDH）基因，并对其进行生物信息学预测与分析。研究指出，成功克隆表达了细粒棘球绦虫EgPDH基因并进行了生物信息学预测分析，为进一步研究该蛋白功能奠定了基础。该文发表在2015年第04期《中国血吸虫病防治杂志》上。 提取细粒棘球绦虫Total-RNA并反转录成cDNA，以此为模板扩增目的基因。将目的
近期，内蒙古民族大学蒙医药学院研究人员发表论文，旨在克隆表达细粒棘球绦虫丙酮酸脱氢酶（EgPDH）基因，并对其进行生物信息学预测与分析。研究指出，成功克隆表达了细粒棘球绦虫EgPDH基因并进行了生物信息学预测分析，为进一步研究该蛋白功能奠定了基础。该文发表在2015年第04期《中国血吸虫病防治杂志》上。
提取细粒棘球绦虫Total-RNA并反转录成c DNA，以此为模板扩增目的基因。将目的基因连接至p ET28b构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21（DE3）进行重组表达。采用Signal P4.1、TMHMM sever v.2.0和Target P1.1对EgPDH编码蛋白序列分别进行信号肽、跨膜区及亚细胞定位的预测。采用SMART分析EgPDH编码蛋白结构域，用BLASTP和Gene Doc进行EgPDH同源序列比对及保守位点分析，并采用MEGA6软件邻接法构建系统进化树。
结果显示， 成功克隆并构建重组质粒p ET28bEgPDH，目的基因大小约1 080 bp，重组蛋白以可溶性形式表达。EgPDH为信号肽的分泌蛋白，并含转酮酶结构域，其高度保守酶活性位点分别为Glu57、Leu72、Ile86、Phe114。系统进化树分析显示EgPDH与多房棘球绦虫PDH亲缘关系最近。
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