应激活化蛋白激酶信号通路及其靶基因对氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的影响
日前，郑州大学第一附属医院眼科、广东省人民医院眼科广东省眼病防治研究所广东省医学科学院和南方医科大学的研究人员共同发表文章，旨在研究JNK/c-Jun通路及其靶基因Bim与PUMA在氧化应激诱导的LECs凋亡中的作用。研究表明，H2O2诱导JNK激活并引起Bim、PUMA和c-Jun蛋白及其mRNA表达上调，其作用呈时间依赖性；抑制JNK/c-Jun通路及干扰Bim或PUMA的表达能对H2O2诱导的人LECs的凋亡起保护作用。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012年第30卷07期。
日前，郑州大学第一附属医院眼科、广东省人民医院眼科广东省眼病防治研究所广东省医学科学院和南方医科大学的研究人员共同发表文章，旨在研究JNK/c-Jun通路及其靶基因Bim与PUMA在氧化应激诱导的LECs凋亡中的作用。研究表明，H2O2诱导JNK激活并引起Bim、PUMA和c-Jun蛋白及其mRNA表达上调，其作用呈时间依赖性；抑制JNK/c-Jun通路及干扰Bim或PUMA的表达能对H2O2诱导的人LECs的凋亡起保护作用。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012年第30卷07期。
该研究将人LECs系HLEC-B3在含质量分数10％胎牛血清的DMEM培养基中培养和传代。将80％融合的细胞接种在24孔板并随机分为无H2O2或H2O2(50 μmol/L)处理4、8、12h组，Hoechst 33258染色观察细胞形态并计数细胞凋亡率，采用Western blot法检测各组HLEC-B3细胞中JNK/c-Jun通路的激活情况和Bim、PUMA蛋白的表达水平，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测c-Jun、Bim、PUMA mRNA在HLEC-B3细胞中的表达。在H2O2处理的细胞培养基中加入JNK/c-Jun通路抑制剂CEP11004或SP600125处理4h，以无H2O2或H2O2+DMSO处理的细胞分别作为阴性和阳性对照组，Hoechst 33258染色观察各组LECs的凋亡情况并检测JNK/c-Jun通路的激活情况和Bim、PUMA蛋白的表达。当培养细胞达60％融合时，将200 pmol/L的Bim或PUMA小分子干扰片段转染细胞24 h，然后用H2O2处理细胞采用Western blot法和RT-PCR法检测Bim、PUMA蛋白及其mRNA在HLEC-B3细胞中的表达。
结果显示，H2O2处理HLEC-B3 4、8、12h后，其细胞凋亡率的总体比较差异有统计学意义(F=1909.433，P=0.000)，H2O2处理HLEC-B3 4、8、12h细胞凋亡率分别为(4.30±1.15)％、(27.08±0.74)％和(46.59±0.91)％，与无H2O2处理组(2.74±0.21)％比较差异均有统计学意义(P=0.049、0.000、0.000)。与无H2O2处理组比较，不同时间H2O2处理组JNK/c-Jun通路的激活和Bim、PUMA蛋白及其mRNA在HLEC-B3细胞中的表达强度均明显增加；加入CEP11004或SP600125后，上述因子表达下调，与DMSO培养组比较凋亡率显著下降，差异均有统计学意义(均P=O。000)。转染Bim或PUMA小分子干扰片段后，H2O2处理HLEC-B3 12 h组的细胞凋亡率明显高于Bim基因敲除组和PUMA基因敲除组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。
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