NY-ESO-1 致敏树突状细胞诱导的细胞毒性 T 淋巴细胞对视网膜母细胞瘤细胞的特异性杀伤作用
日前，重庆医科大学附属第二医院眼科重庆市眼科学重点实验室的研究人员周学智和周希瑗发表文章，旨在研究肿瘤-睾丸抗原的New York-esophageal-1(NY-ESO-1)致敏树突状细胞(DCs)诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对RB细胞株HXO-RB44的杀伤作用。研究表明，NY-ESO-1质粒转染DCs诱导的CTL对RB细胞具有特异性杀伤作用，为RB免疫治疗提供了一种新的方法。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012年第30卷07期。
日前，重庆医科大学附属第二医院眼科重庆市眼科学重点实验室的研究人员周学智和周希瑗发表文章，旨在研究肿瘤-睾丸抗原的New York-esophageal-1(NY-ESO-1)致敏树突状细胞(DCs)诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对RB细胞株HXO-RB44的杀伤作用。研究表明，NY-ESO-1质粒转染DCs诱导的CTL对RB细胞具有特异性杀伤作用，为RB免疫治疗提供了一种新的方法。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012年第30卷07期。
该研究选取聚合酶链反应(PCR)技术对NY-ESO-1质粒的目的基因片段进行扩增，使用SalI限制酶和EcoRI限制酶进行双酶切，切胶回收DNA片段。将其连接入pDC316质粒，构建pDC316/NY-ESO-1真核表达载体并再进行酶切鉴定。免疫荧光及Western blot 法检测NY-ESO-1蛋白在HXO-RB44细胞株中的表达。Ficoll法分离血获得单个核细胞，通过RPMI 1640重悬，调整细胞密度为1×106个/ml，通过重组人集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)诱导培养外周血来源的DCs，通过重组质粒转染DCs，以脂多糖诱导DCs成熟，DCs与淋巴细胞数量比为1∶25的比例混合培养HXO-RB44细胞，通过MTT法检测CTL的增生情况。在培养液中同时加入CTL细胞，MTT法检测HXO-RB44细胞的活力。
结果显示，重组质粒pDC316/NY-ESO-1的目的片段序列与NY-ESO-1基因序列完全相同，酶切鉴定结果与预期一致。Western blot法以及免疫荧光检测结果显示，NY-ESO-1在细胞株HXO-RB44中呈强阳性表达。经rhGM-CSF和rhIL-4成功诱导出的外周血DCs，重组质粒转染后其表型分子分别是HLA-DR为42.1％，CD80为54.2％，CD83为39.7％，CD86为94.8％。MTT法检测表明，pDC316/NY-ESO-1质粒转染的DCs诱导的CTL组的增生能力强于未转染组，致敏的DCs与淋巴细胞比例为1∶100时诱导CTL效果最为显著，与未转染组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，CTL对肿瘤细胞的杀伤作用明显强于未转染组和无DCs组，且效靶比为75：1时杀伤率最强，差异有统计学意义(P＜0.05)。
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