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紫外线-B激光照射对α晶状体蛋白的影响及3-吲哚甲醇对其分子伴侣活性的保护作用

作者：董静文来源：金宝搏网站登录技巧日期：2012-12-09

导读

日前，北京大学人民医院眼科视觉损伤与修复教育部重点实验室和北京同仁医院眼科的研究人员共同发表文章，旨在研究紫外线-B激光照射对α晶状体蛋白结构和分子伴侣功能的影响，探讨I3C对α晶状体蛋白分子伴侣功能的保护作用。研究表明，紫外线-B激光照射可以造成α晶状体蛋白分子结构的变化及分子伴侣活性的降低，I3C对于α晶状体蛋白分子伴侣活性具有保护作用。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012年第30卷06期。

关键字： α晶状体蛋白 | 3-吲哚甲醇 | 紫外线-B激光 | 分子伴侣活性

　　该研究取新鲜1岁龄牛眼球的晶状体，采用凝胶层析法提纯牛的α晶状体蛋白，并按照快速蛋白液相色谱( FPLC)吸收谱线收集α晶状体蛋白。然后分别以23.75、118.75、475.00、1187.50、2375.00、4750.00、11 875.00和23 750.00mJ/cm2的紫外线-B激光照射在凸透镜后一固定位置的α晶状体蛋白，然后通过改变α晶状体蛋白在凸透镜后的位置达到改变照射能量的目的，使各组照射能量分别为28 535.00、6730.00、3435.00、1910.00、1040.00 mJ/cm2.使用紫外分光光度仪测量紫外线-B激光照射前后α晶状体蛋白的紫外吸收谱线(色氨酸荧光谱)。在照射能量为475.00、1187.50、2375.00、4750.00、11 875.00mJ/cm2照射后的α晶状体蛋白溶液中分别加入50μmol/L和100 μmol/L的I3C，并进行过氧化氢酶(CAT)热凝聚实验，判断α晶状体蛋白分子伴侣活性，未加入50 μmol/L和100 μmol/L I3C的α晶状体蛋白溶液进行相同的实验作为对照，采用分光光度仪测量360 nm波长处各组α晶状体蛋白抑制CAT热凝聚的吸光度(A360)值，计算各干预组与对照组A值的百分数作为评价分子伴侣活性的指标。

　　结果显示，α晶状体蛋白紫外吸收谱测定发现，紫外线-B激光照射能量为1187.50 mJ/cm2时，α晶状体蛋白A280值降到10％左右，当照射能量达到23.75 J/cm2时，α晶状体蛋白A280值降到2％以下，二者呈负相关(R2=0.925)。色氨酸荧光光谱测定表明，紫外线-B激光照射强度与色氨酸荧光强度呈负相关(R2=0.996)，而与色氨酸代谢产物N-甲酰犬尿氨酸(N-FK)的荧光强度呈正相关(R2=0.949)。CAT热凝聚实验表明，加入50 μmol/L和100μmol/L的I3C后，各强度的激光照射组α晶状体蛋白的相对A360值均明显高于对照组，差异有统计学意义(P=0.000)；α晶状体蛋白分子伴侣功能下降幅度低于对照组，差异有统计学意义(P=0.000)。分子伴侣活性随着激光照射能量的增加与不加入I3C的α晶状体蛋白相比降低变慢。