基质金属蛋白酶3在晶状体上皮细胞中的表达及其意义
日前，南华大学第二临床学院南华大学附属第二医院眼科，四川大学华西医学院眼科学教研室和深圳市眼科医院的研究人员共同发表文章，旨在构建pEGFP-N1-MMP-3真核重组质粒并转染晶状体上皮细胞(LECs)，观察MMP-3在LECs中的表达，探讨后发性白内障基因治疗的可能性。研究表明，此实验成功构建了pEGFP-N1-MMP-3质粒，并能够在猪LECs中表达，为进一步研究该蛋白在LECs中的表达与功能奠定了基础。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012年第30卷06期。
日前，南华大学第二临床学院南华大学附属第二医院眼科，四川大学华西医学院眼科学教研室和深圳市眼科医院的研究人员共同发表文章，旨在构建pEGFP-N1-MMP-3真核重组质粒并转染晶状体上皮细胞(LECs)，观察MMP-3在LECs中的表达，探讨后发性白内障基因治疗的可能性。研究表明，此实验成功构建了pEGFP-N1-MMP-3质粒，并能够在猪LECs中表达，为进一步研究该蛋白在LECs中的表达与功能奠定了基础。该文章发表在《中华实验眼科杂志》2012年第30卷06期。
该研究取6只新鲜猪晶状体，将囊膜用组织块法进行原代培养，获得LECs。用E。coli DH5α MMP-3和E。coli DH5α pEGFP-N1质粒构建MMP-3的真核表达重组质粒pEGFP-N1-MMP-3，通过双酶切，DNA测序分析鉴定人MMP-3片段的准确性。将构建的pEGFP-N1-MMP-3转染至猪LECs中，通过绿色荧光蛋白(GFP)间接观察MMP-3在猪LECs中的表达，用Western blot法检测pEGFP-N1-MMP-3真核重组质粒转染后LECs表达产物FN的相对表达量，间接评估MMP-3的表达量。
结果显示，双酶切鉴定结果符合质粒pEGFP-N1及目的片段MMP-3大小。软件分析测序结果表明，重组质粒pEGFP-N1-MMP-3中的MMP-3基因与GenBank中的人MMP基因序列相似性达99.6％，表示目的片段已正确插入pEGFP-N1载体。原代培养猪LECs，将重组质粒pEGFP-N1-MMP-3转染入猪LECs，荧光显微镜下可见明显的GFP绿色荧光。Western blot检测表明，FN在pEGFP-N1 -MMP-3真核重组质粒转染组的表达量为0.666±0.008，空质粒转染组FN的表达量为0.326±0.071，差异有统计学意义(P=0.000)。
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