YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及机制初探
浙江省宁波市第一医院检验科、同济大学附属同济医院血液科共同发表论文，旨在研究生存素(survivin)抑制剂YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及作用机制，为应用YM155治疗淋巴瘤提供实验依据。研究指出，YM155能够有效促进淋巴瘤SUDHL-4细胞株凋亡，其机制可能是由于survivin蛋白下调绕过caspase-9直接激活下游caspase-3，从而切割DNA引发凋亡；bcl-2家族基因可能并未参与此过程。该文章发表在2012年第92卷第10期《中华医学杂志》上。
浙江省宁波市第一医院检验科、同济大学附属同济医院血液科共同发表论文，旨在研究生存素(survivin)抑制剂YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及作用机制，为应用YM155治疗淋巴瘤提供实验依据。研究指出，YM155能够有效促进淋巴瘤SUDHL-4细胞株凋亡，其机制可能是由于survivin蛋白下调绕过caspase-9直接激活下游caspase-3，从而切割DNA引发凋亡；bcl-2家族基因可能并未参与此过程。该文章发表在2012年第92卷第10期《中华医学杂志》上。
培养滤泡淋巴瘤细胞株SUDHL-4至对数生长期，加入YM155形成一系列浓度梯度：100、10、1、0.1、0 ng/ml，培养24、48、72 h后进行活细胞计数试剂盒(CCK)8实验，观察YM155对其生长抑制效应，计算其细胞半数抑制药物浓度(IC50)。加入YM155至培养瓶中使其药物浓度为1 ng/ml，培养24、48、72 h进行流式细胞术检测，膜联蛋白(Annexin)V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染法观察细胞凋亡情况。选取不加药的对照组和加YM155后24、48 h的实验组细胞抽提总RNA，然后进行反转录PCR(RT-PCR)检测48 h时抗凋亡基因bcl-2、bcl-xl、survivin和促凋亡基因bid、bax的mRNA的相对表达量，检测24h时survivin mRNA的相对表达量。同时抽提各个时间点的总蛋白用Western印迹技术检测survivin、半胱氨酸蛋白酶(caspase)9、活化的caspase-9、caspase-3和活化的caspase-3蛋白的表达量。
结果显示，YM155对SUDHL-4具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性，24、48、72 h的IC50分别为6.1、2.7、1.2ng/ml。用流式细胞仪分析发现细胞凋亡比例随时间的推移逐步增加(17.3％±2.1％、35.7％±3.3％、54.6％±4.3％比2.1％±0.3％,均P＜0.05)；PCR结果显示YM155作用后24和48 h下调survivin基因mRNA的表达(0.72±0.02、0.56±0.01比1.00,均P＜0.05)，但bcl-2家族基因表达变化不显著(P＞0.05)。Western印迹检测发现随着时间的推移，survivin、caspase-3蛋白的表达逐渐减低，caspase-9和活化的caspase-9蛋白表达没有明显变化，而活化的caspase-3表达逐渐增加。
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