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Tet-on慢病毒系统表达弓形虫ROP18的研究

作者：杨俊岭整理来源：日期：2015-12-29

导读

　　近期，江苏大学医学院研究人员发表论文，旨在用Tet-on慢病毒载体系统构建稳定表达弓形虫棒状体蛋白18（ROP18）的293T细胞株。研究指出，采用Tet-on慢病毒载体系统构建了稳定表达弓形虫ROP18的293T细胞株。该文发表在2015年第01期《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》上。　　PCR扩增ROP18基因序列插入慢病毒载体pLVCT-tTR-KRAB中，构建带有ROP18活性片段的慢

　　近期，江苏大学医学院研究人员发表论文，旨在用Tet-on慢病毒载体系统构建稳定表达弓形虫棒状体蛋白18（ROP18）的293T细胞株。研究指出，采用Tet-on慢病毒载体系统构建了稳定表达弓形虫ROP18的293T细胞株。该文发表在2015年第01期《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》上。

　　PCR扩增ROP18基因序列插入慢病毒载体p LVCT-t TR-KRAB中，构建带有ROP18活性片段的慢病毒载体p LVCT-t TRKRAB-ROP18。经鉴定后将该重组载体（6μg）与辅助质粒ps PAX2（4μg）和p MD2.G（2μg）共同转染293T细胞，荧光显微镜下观察细胞荧光。于转染后48和72 h收集含有慢病毒颗粒上清液，感染293T细胞。以1μg/ml强力霉素（DOX）诱导293T细胞表达ROP18，荧光显微镜下观察细胞荧光，RT-PCR法检测293T细胞中的ROP18表达情况。

　　结果显示， PCR扩增rop18片段为960 bp，与预期大小一致。经PCR和酶切鉴定重组慢病素载体构建成功。转染48 h后，293T细胞于荧光显微镜下可见绿色荧光。经DOX诱导24 h即可观察到293T细胞中明亮绿色荧光。RT-PCR检测结果显示，293T细胞ROP18可产生960 bp特异条带，与预期结果一致。