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基础医学

携带小鼠信号转导子及转录激活子3重组慢病毒载体的构建与鉴定

作者:杨艳辉 整理 来源: 日期:2015-12-25
导读

           近期,重庆市渝北区人民医院泌尿外科研究人员发表论文,旨在构建携带小鼠信号转导子及转录激活子3(STAT3)的重组慢病毒载体,并检测STAT3的蛋白表达,进行慢病毒包装并鉴定。研究指出,成功构建了STAT3基因的重组慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础。该文发表在2015年第26期《重庆医学》杂志上。   将小鼠成肌细胞总RNA通过STAT3引物逆转录为cDNAPCR扩增、回收后,同pLVX

  近期,重庆市渝北区人民医院泌尿外科研究人员发表论文,旨在构建携带小鼠信号转导子及转录激活子3(STAT3)的重组慢病毒载体,并检测STAT3的蛋白表达,进行慢病毒包装并鉴定。研究指出,成功构建了STAT3基因的重组慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础。该文发表在2015年第26期《重庆医学》杂志上。

  将小鼠成肌细胞总RNA通过STAT3引物逆转录为cDNA PCR扩增、回收后,同pLVX-IRES-ZsGreen1载体片段连接,酶切鉴定及测序,将pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3转染293T细胞,48h后收集细胞,Western blot检测STAT3表达量,通过瞬时转染法包装出病毒上清。

  测序结果证实STAT3成功插入pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒载体,成功构建了慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3,共转染293T细胞48h,Western blot检测STAT3表达量明显增强。测定病毒滴度为8.4×107 TU/mL。

   相关链接:http://www.xdfckjz.com/EditorA/WebPublication/wkTextContent.aspx?colType=4&tp=gklb&mid=XDFC

  

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