shRNA干扰DNA甲基转移酶1表达沉默可抑制人食管鳞状细胞癌KYSE30细胞的增殖并诱导凋亡
近期，山东大学附属省立医院消化科研究人员发表论文，旨在探讨DNA甲基转移酶1（DNAmethyltransferase1，DNMT1）基因表达沉默对食管鳞状细胞癌（esophagealsquamouscellcarcinoma，ESCC）KYSE30细胞增殖和凋亡的影响。研究指出，DNMT1基因表达沉默能够诱导KYSE30细胞中抑癌基因RAR的重新表达，这可能是抑制KYSE30细胞的增殖并诱
近期，山东大学附属省立医院消化科研究人员发表论文，旨在探讨DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase 1，DNMT1）基因表达沉默对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）KYSE30细胞增殖和凋亡的影响。研究指出，DNMT1基因表达沉默能够诱导KYSE30细胞中抑癌基因RARβ的重新表达，这可能是抑制KYSE30细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡的主要作用机制。该文发表在2015年第11期《肿瘤》杂志上。
设计并构建携带有特异性针对DNMT1基因的DNMT1-sh RNA及阴性对照-sh RNA重组载体。采用脂质体法将各sh RNAs转染至KYSE30细胞中，通过嘌呤霉素来筛选稳定转染的细胞株；蛋白质印迹法检测各转染组细胞中DNMT1蛋白的表达情况；RT-PCR法检测KYSE30细胞中DNMT1基因沉默后对抑癌基因视黄酸受体β（retinoic acid receptor beta，RARβ）m RNA表达水平的影响；MTT法检测DNMT1基因沉默后对KYSE30细胞增殖的影响；FCM法检测对细胞凋亡的影响。
结果显示， 筛选获得稳定转染至KYSE30细胞且干扰效果最好的DNMT1-sh RNA2；蛋白质印迹法显示DNMT1-sh RNA2能够显著抑制KYSE30细胞中DNMT1蛋白的表达；同时RT-PCR检测发现，采用DNMT1sh RNA2干扰DNMT1的表达后能使抑癌基因RARβm RNA重新表达；并且，KYSE30细胞增殖能力下降，凋亡率增加（P值均<0.01）。
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