近期，兰州大学第二医院输血科研究人员发表论文，旨在沉默人膀胱癌EJ细胞中p21/Waf1基因的表达，并探讨p21/Waf1表达下调对膀胱癌特异性溶瘤腺病毒复制及对EJ细胞增殖的影响。研究指出，成功建立了p21/Waf1基因沉默表达的EJ细胞，沉默p21/Waf1基因的表达能增强膀胱癌特异性溶瘤腺病毒的复制能力，并对EJ细胞的增殖有明显的抑制作用。该文发表在2015年第10期《肿瘤》杂志上。

　　设计并合成特异性针对p 21/Waf 1基因的shRNA，插入含绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）编码基因的p Magic 7.1载体，构建p21/Waf1-sh RNA重组慢病毒质粒p LVT1051，并进行PCR和测序鉴定。将p LVT1051、p CMV-VSV-G和p CMV-d R8.91三种质粒共转染293T细胞，包装产生慢病毒。将携带有p21/Waf1-sh RNA的慢病毒感染EJ细胞，采用嘌呤霉素筛选p21/Waf1-sh RNA稳定转入的EJ细胞，采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测p21/Waf1-sh RNA稳定感染后EJ细胞中p21/waf1 m RNA和蛋白的表达水平。将膀胱癌特异性溶瘤腺病毒Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A感染p 21/waf 1基因沉默的EJ细胞，采用蛋白质印迹法检测病毒复制相关指标E1A和Hexon蛋白的表达水平，MTT法检测腺病毒Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A对EJ细胞增殖的影响。

　　结果显示， 成功构建了携带有p21/Waf1-sh RNA的重组慢病毒表达载体并获得相应的慢病毒；经嘌呤霉素筛选2周后成功获得稳定感染的EJ细胞。p21/Waf1-sh RNA能明显降低EJ细胞中p21/Waf1 m RNA及蛋白的表达水平，差异均有统计学意义（P值均<0.05）。膀胱癌特异性溶瘤腺病毒（Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A）作用于p 21/waf 1基因沉默的EJ细胞后，其病毒复制相关指标E1A和Hexon的表达水平明显上调，对EJ细胞的增殖抑制作用明显增强（P<0.01）。

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