载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌细胞中糖原合成酶激酶3β表达的研究
近期，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所生化室研究人员发表论文，旨在构建和筛选能高效、特异性抑制人GSK-3基因表达的siRNA表达载体，探讨其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。研究指出，成功构建了靶向GSK-3基因的siRNA表达载体，沉默GSK-3能显著抑制HepG2细胞的生长并诱导其发生凋亡。该文发表在2015年第02期《中国医药生物技术》杂志上。 提取人L02细胞总RNA，
近期，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所生化室研究人员发表论文，旨在构建和筛选能高效、特异性抑制人GSK-3β基因表达的siRNA表达载体，探讨其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。研究指出，成功构建了靶向GSK-3β基因的siRNA表达载体，沉默GSK-3β能显著抑制HepG2细胞的生长并诱导其发生凋亡。该文发表在2015年第02期《中国医药生物技术》杂志上。
提取人L02细胞总RNA，RT-PCR扩增GSK-3β基因序列，克隆至pSEB-HUS真核表达载体，构建pSEB-G重组质粒。将设计、合成的3条靶向GSK-3β基因编码区的siRNA及阴性对照分别克隆至pSEB-G，构建siRNA表达载体pSEB-si1-G、pSEB-si2-G、pSEB-si3-G及pSEB-siN-G。将siRNA表达载体瞬时转染HepG2细胞，通过绿色荧光信号、RT-PCR和Western blot观察和检测其对GSK-3β基因的抑制效果，MTT实验和caspase-3活性分析检测其对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。
经双酶切及测序证实，所构建si RNA表达载体目的基因大小、序列与预期相符。瞬时转染HepG2细胞后，其中的pSEB-si1-G能使细胞中绿色荧光信号明显减少，可显著抑制GSK-3βmRNA的表达及蛋白的合成，并使HepG2细胞增殖明显降低，caspase-3活性显著升高。
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