IL-13和IL-33重组蛋白的原核表达和纯化
作者：杨艳辉 整理 来源： 日期：2015-11-25
导读
近期，四川医科大学免疫学教研室研究人员发表论文，旨在利用PET101/D-TOPO蛋白表达系统，表达人IL-13和IL-33重组蛋白。研究指出，成功构建出IL-13和IL-33重组质粒，成功表达并纯化出IL-13和IL-33重组蛋白。该文发表在2015年第05期《泸州医学院学报》杂志上。 以健康人外周血单个核细胞（PBMC）的mRNA为模板，采用RT-PCR扩增IL-13和IL-33开放
近期，四川医科大学免疫学教研室研究人员发表论文，旨在利用PET101/D-TOPO蛋白表达系统，表达人IL-13和IL-33重组蛋白。研究指出，成功构建出IL-13和IL-33重组质粒，成功表达并纯化出IL-13和IL-33重组蛋白。该文发表在2015年第05期《泸州医学院学报》杂志上。
以健康人外周血单个核细胞（PBMC）的mRNA为模板，采用RT-PCR扩增IL-13和IL-33开放阅读框，将扩增所得目的基因连接到质粒p ET101/DTOPO，构建出重组质粒并转化大肠杆菌BL21，诱导其表达IL-13和IL-33重组蛋白，纯化后进行鉴定。
RT-PCR扩增所得IL-13 c DNA为490 bp，IL-33 cDNA大小为800 bp，将其分别连接到质粒PET101/D-TOPO，构建出IL-13和IL-33重组质粒，分别转化大肠杆菌BL21，诱导其表达。SDS-PAGE电泳分析，发现目的条带大小分别为29 kDa和35 kDa左右，Western blotting结果证实重组表达正确。
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