人凋亡相关因子基因RNA干扰慢病毒载体的构建与包装
作者：杨艳辉 整理 来源：
日期：2015-11-19
导读
近期，蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心研究人员发表论文，旨在构建人凋亡相关因子（Fas）基因短发夹RNA慢病毒载体，实现沉默人脐带间充质干细胞Fas基因的表达。研究指出，成功构建人Fas基因RNA干扰慢病毒载体，为下一步转染脐带间充质干细胞提供理论参考。该文发表在2015年第01期《蚌埠医学院学报》杂志上。 根据Fas基因mRNA序列，设计4组靶向Fas基因的短发夹RNA序列，合成、退火
近期，蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心研究人员发表论文，旨在构建人凋亡相关因子（Fas）基因短发夹RNA慢病毒载体，实现沉默人脐带间充质干细胞Fas基因的表达。研究指出，成功构建人Fas基因RNA干扰慢病毒载体，为下一步转染脐带间充质干细胞提供理论参考。该文发表在2015年第01期《蚌埠医学院学报》杂志上。
根据Fas基因mRNA序列，设计4组靶向Fas基因的短发夹RNA序列，合成、退火形成双链DNA片段，与经过DNA内切酶Bam HⅠ、EcoRⅠ双酶切后的LV3载体连接转入感受态细胞，对长出的克隆进行菌落PCR鉴定，并对阳性克隆进行测序及比对分析。通过转染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。
经酶切及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功，通过荧光显微镜观察证明病毒转入293T细胞，感染效率>90%，并获得高滴度的慢病毒载体，病毒滴度为3×108TU/ml。
相关链接：http://med.wanfangdata.com.cn/Periodical/bbyxyxb
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