过氧化氢(H2O2)、紫外线等氧化应激可以导致持续的活性氧(ROS)刺激，加剧氧化应激损害，导致人皮肤细胞衰老，被认为是导致人细胞衰老的重要因素之一。衰老标记蛋白30(SMP30)，作为β联蛋白调控皮肤细胞衰老的重要下游因子，可能介导β联蛋白延缓氧化应激所致人皮肤成纤维细胞衰老;自噬作为真核细胞清除无用细胞器及降解变性蛋白质聚集体的细胞途径，在各种真核生物衰老过程中发挥重要作用。为进一步研究H2O2对NHSF衰老相关因子及细胞自噬的影响，田黎明等采用H2O2诱导NHSF提前衰老，观察SMP30及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型(LC3Ⅱ)表达的变化。

H2O2、紫外线等氧化应激可以导致持续的活性氧(ROS)刺激，加剧氧化应激损害，导致人皮肤细胞衰老，被认为是导致人细胞衰老的重要因素之一。衰老标记蛋白30(SMP30)，作为β联蛋白调控皮肤细胞衰老的重要下游因子，可能介导β联蛋白延缓氧化应激所致人皮肤成纤维细胞衰老;自噬作为真核细胞清除无用细胞器及降解变性蛋白质聚集体的细胞途径，在各种真核生物衰老过程中发挥重要作用。为进一步研究H2O2对NHSF衰老相关因子及细胞自噬的影响，田黎明等采用H2O2诱导NHSF提前衰老，观察SMP30及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型(LC3Ⅱ)表达的变化。

用150 μmol/L H2O2处理2 ~ 4代NHSF 2 h，构建细胞衰老模型作为H2O2组，而未处理的NHSF作为对照组。细胞衰老β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法检测衰老细胞比例，间接免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3的表达，反转录PCR(RT-PCR)检测SMP30 mRNA的表达，Western印迹法检测SMP30和LC3蛋白的表达。

激光共聚焦荧光显微镜下观察两组正常人皮肤成纤维细胞内自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达(间接免疫荧光染色 × 400) 绿色荧光显示LC3表达，绿色荧光越强，LC3的表达量越高，自噬越强。DAPI：4，6-联脒-2-苯基吲哚，Merge代表LC3绿色荧光与DAPI蓝色荧光的融合

H2O2组NHSF的SA-β-gal染色阳性率(41.70% ± 2.95%)显著高于对照组(3.03% ± 0.25%，P < 0.05)。间接免疫荧光结果显示，H2O2组NHSF LC3阳性率(12.60% ± 1.57%)明显低于对照组(23.67% ± 3.04%，P < 0.05)。Western印迹显示，H2O2组LC3Ⅰ/GAPDH比值(0.40 ± 0.02)与对照组(0.41 ± 0.04)比较差异无统计学意义(P > 0.05)，而H2O2组LC3Ⅱ/GAPDH比值(0.20 ± 0.02)明显低于对照组(0.80 ± 0.03，P < 0.05)，且H2O2组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(0.51 ± 0.03)亦明显低于对照组(1.98 ± 0.23，P < 0.05)。H2O2组SMP30 mRNA和蛋白水平(与GAPDH mRNA和蛋白的比值分别为0.16 ± 0.01和0.27 ± 0.02)明显低于对照组(分别为0.35 ± 0.01和0.63 ± 0.02)，均P < 0.05。

参考文献略。

作者：田黎明、彭圆、胡荣毅、程杨，H2O2对人皮肤成纤维细胞衰老标记蛋白30及自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达的影响[J].中华皮肤科杂志，2017，50(12)：899-903.