ANP基因突变与心房颤动
我们通过分子生物学方法构建NPPAc.413T>C突变子的质粒，体外大量表达突变的ANP（mANP），与野生型ANP（wANP）比较对犬心房电生理的影响。由于目前公认AF发生可能和心房、肺静脉、心脏自主神经有关，我们将mANP、wANP和生理盐水（对照）通过微注射的方法分别注入右心耳、肺静脉、神经节丛等部位，观察mANP对这些部位电生理的作用。
心房利钠利尿肽( atrial natriuretic peptide, ANP) ，亦称心钠素，是上世纪80年代初最早分离出的利钠利尿肽家族成员,是维持血压、水和电解质平衡及心血管稳态的重要调控因子。在临床上，很早就观察到ANP与心房颤动（AF）之间存在一定的关系。如AF发作时，部分患者小便增多，当时认为其机制是AF时ANP分泌增加所致。2008年，Hodgson-Zingman等研究了一个家族性AF家系的11名患者，发现编码ANP的基因NPPA（natriuretic peptide precursor A）基因发生了突变，突变位点在染色体1p36-p35。并检测到上述患者ANP嵌合子的浓度显著升高；体外实验证实ANP突变体可显著缩短心脏的不应期。作者推测其致AF的机制可能通过cGMP信号通路导致心脏电生理的不稳定性。Dickey等对同一突变基因及其表达蛋白的研究发现，突变ANP基因（mANP）对ANP的受体影响轻微，其作用是通过调节ANP蛋白水解，使循环ANP浓度升高所致。以上研究证实ANP基因突变可导致家族性AF。但有下列问题尚未明确：1、散发性AF是否也存在ANP基因突变？如有，其突变位点是否与Hodgson-Zingman报道一致？2、mANP突变后导致ANP浓度增高，到底通过什么机制导致AF发生？
我们对384例散发性AF患者（均为孤立性AF）和844例对照人群进行病例对照关联分析和突变分析，在NPPA上发现了6个突变体，其中2个在5'-UTR，2个在3'-UTR, 还有2个存在错义置换突变。其中三个突变体c.413T>C，c.*48G>A 和 c.*133G>T在844例对照人群中均未出现，其他三种突变现象也见于对照人群。所以，初步认定NPPA的上述三种突变和AF发生有关。我们重点研究了c.413T>C突变导致AF发生的机制。
我们通过分子生物学方法构建NPPAc.413T>C突变子的质粒，体外大量表达突变的ANP（mANP），与野生型ANP（wANP）比较对犬心房电生理的影响。由于目前公认AF发生可能和心房、肺静脉、心脏自主神经有关，我们将mANP、wANP和生理盐水（对照）通过微注射的方法分别注入右心耳、肺静脉、神经节丛等部位，观察mANP对这些部位电生理的作用。结果发现：
1、mANP对AF阈值（AF threshold, AF-TH）的影响：使用局部心肌不应期内高频刺激（HFS）测量房颤阈值。在右上、右下肺静脉和左心耳分别进行HFS，mANP和wANP均能显著降低AF-TH，且前者降低的幅度显著高于后者，对照组的AF-TH则无显著变化。
2、mANP对有效不应期（ERP）及AF易感窗的影响。所有部位注射mANP和wANP后，AF易感窗均显著增宽，且前者导致的增宽程度显著大于后者。注射所在部位的ERP均显著缩短，同样mANP导致的缩短程度显著大于wANP。对照组则无显著变化。
3、mANP对心脏自主神经的作用。通过持续刺激右前神经节丛（ARGP）1mian，观察窦性心律变慢的情况来反映心脏自主神经功能。结果发现注射mANP3小时内，心脏自主神经功能显著增强。
由上述研究可以证实，NPPAc.413T>C突变可导致AF诱发阈值下降，心耳、肺静脉等部位的ERP显著缩短，AF易感窗增宽，所以NPPAc.413T>C突变可以导致AF发生，其机制之一可能与激活心脏自主神经活动有关。
专题链接：http://zt.cmt.com.cn/zt/cafs2012/index.html
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