上海交通大学医学院苏州九龙医院肿瘤科 上海交通大学医学院瑞金医院肿瘤学科 上海交通大学医学院仁济医院肿瘤科 张凤春 徐迎春 王红霞 南飞飞 徐海燕 任芳 陈彬 杨懿瑾 胡春

　　目的：本研究从MCF-7细胞系、人原代乳腺癌细胞中分选肿瘤干细胞，寻找肿瘤干细胞特异性差异表达分子，探索其对治疗疗效的预测分子。

　　方法：乳腺癌MCF-7细胞株肿瘤干细胞分选和乳腺癌原代上皮细胞分离及微球体培养，采用Agilent芯片基因表达谱分析， MicroRNA表达谱分析、Real-time PCR基因检测、Pathway Array 检测。

　　结果：44例术前均未接受过治疗的乳腺癌患者中有11例原代乳癌细胞培养出微球体，患者年龄为33岁到63岁，平均年龄为44.91岁，其中病理分级为III级的患者有7名，占63.64%，II级者有4名，占36.36%。Luminal A型与Luminal B型患者乳腺癌细胞所形成的微球体形态较为相似，均表现为较致密，体积大的微球体；Basal like型患者所成微球体较为疏松，体积也较大。计数大于100μm的微球体，计算各组微球体形成率。从IDC1和IDC2患者乳腺癌组织微球体培养富集肿瘤干细胞，表达谱芯片检测了41094个基因，与分化细胞相比，以差异倍数大于20为标准筛选差异表达基因，微球体细胞中高表达的基因有26个，低表达的基因有46个。RT-PCR验证发现两个标本的微球体中NANOG、OCT4、KLF4、SOX2和MDR1 基因的表达均较分化细胞明显升高。Pathway Array 高通量检测MCF7 分选后乳腺癌干细胞信号通路蛋白差异表达，其中共有40 个蛋白及磷酸化位点差异表达大于1.5 倍。其中，10 个蛋白及磷酸化位点显示表达上调、30个显示表达下调。MicroRNA芯片原代乳腺癌微球体细胞及相应分化细胞共检测了962个MicroRNAs，以差异倍数大于4为标准筛选，显示微球体细胞中高表达的MicroRNA有36个，低表达的MicroRNA有10个。

　　结论：从基因表达谱芯片、MicroRNAs表达谱芯片中获得的差异表达基因，与上述蛋白及的预测靶基因进行比较，发现有15个基因重合，这些分子功能与DNA损伤修复、细胞粘连、胰岛素信号通路、GnRH 信号通路、ErbB 信号通路、mTOR信号通路、细胞凋亡、MAPK 信号通路及细胞周期的调节密切相关，microRNA芯片显示miR-630上调7.88倍，可降低细胞对化疗药物的敏感性；miR-214下调8.65倍，可能降低了抑制肿瘤细胞生长。这些差异表达的基因和蛋白对于治疗的选择和预后判断有重要的价值，可能成为临床疗效预测靶标(在继续随访中)。