近期，来自复旦大学附属肿瘤医院的陈海泉教授、复旦大学基础医学院的李飞教授，以及来自中科院上海生科院生物化学与细胞生物学研究所、香港中文大学、美国纽约大学 Langone医学中心、Grossman医学院，哈佛大学医学院附属布莱根妇女医院的研究人员组成的研究团队，在Science Adances上发表了一篇Loss of TSC1/TSC2 sensitizes immune checkpoint blockade in non–small cell lung cancer的研究论文，文章揭示了TSC1/TSC2 突变在促进 PD-L1 的表达、增强肿瘤免疫原性的作用。

作者利用小鼠KrasG12D/Trp53−/−（KP）肺癌模型进行了体外和体内CRISPR筛选。

他们把KP细胞改造成表达Cas9，并选择了两个克隆KP-Cas9细胞株(克隆7和克隆9)，再用sgRNA文库将KP-Cas9克隆转染并体外传代后，通过流式细胞术观察到PD-L1表达发生明显的转移。

随后，他们将前15%的PD-L1高表达群体和前15%的PD-L1低表达群体进行分类、测序，发现：Tsc1和Tsc2在PD-L1水平低的群体中sgRNAs显著减少，而在PD-L1水平高的群体中sgRNAs显著增加。

这表明Tsc1或Tsc2的缺失可能促进PD-L1的表达。

TSC2 缺乏可上调肺癌细胞系 PD-L1 的表达

为了验证这个结果，他们用Tsc1或Tsc2的单个sgRNAs转染肺癌细胞株。流式细胞术分析显示，Tsc2的缺失显著提高了KP细胞膜PD-L1的表达水平。

他们建立了KP-Tsc2敲除（KP-Tsc2- KO) 细胞株，流式细胞仪分析显示，KP-Tsc2-KO细胞的PD-L1 mRNA水平高于对照组细胞。说明 Tsc2 可在转录水平上调控 PD-L1 的表达。在KP细胞中，Tsc1表达减少也显著增加了PD-L1的表达。

Tsc2缺失介导的PD-L1表达的上调也在人A549肺癌细胞株中得到验证。

为了研究TSC1/TSC2突变状态与PD-L1表达水平之间的关系，他们分析了复旦大学附属肿瘤医院NSCLC手术切除患者NGS队列的数据。

相比TSC1 / TSC2-野生型，TSC1/TSC2突变的NSCLC患者有明显高的PD-L1-阳性率。而且TSC1 / TSC2扩增肿瘤的PD-L1-阳性率显著降低。

除PD-L1外，TSC2 mRNA水平与TCGA数据中其他非PD-L1免疫检查点亦呈负相关。如：T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域3 (TIM-3)。

生存分析显示，TSC2低表达患者的无复发生存期（RFS）明显低于TSC2高表达患者。这说明，TSC2或TSC1 mRNA水平与NSCLC患者总生存期显著相关。

为了系统描述TSC2缺失NSCLC的肿瘤微环境（TME），他们使用多种算法分析了TSC2 mRNA水平与主要免疫细胞亚型之间的相关性。

结果显示：TSC2 mRNA水平与CD8+ T细胞、CD4+ T细胞、调节性T细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞浸润呈负相关。

为了证实上述TSC2与CD8+ T细胞的相关性，他们对164例非小细胞肺癌患者进行免疫组化（IHC），发现TSC2低表达肿瘤的CD8A也显著升高。

此外，TSC2与TCGA数据库中T细胞激活标志物CD8A、CD8B、颗粒酶A （GZMA）、颗粒酶B（GZMB）、穿孔素1 （PRF1）、C-X-C基序趋化因子配体10（CXCL10）的水平呈显著负相关。

他们分析了 TCGA 数据集中 TSC2 状态与肿瘤微环境的关系，发现TSC2 缺失肿瘤表现出炎症性肿瘤微环境，这表示TSC1/TSC2或可成为ICB治疗的潜在生物标记物。

来源：医学论坛网