重组腺病毒介导BMP-9及促红细胞生成素双基因共转染促进脂肪来源干细胞体外成骨的研究
近期，山东济宁188体育平台论坛 医院188体育平台论坛 颌面外科研究人员发表论文，旨在探讨重组腺病毒介导BMP-9及促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）双基因共转染对脂肪来源干细胞（adipose-derivedstemcells，ADSCs）体外成骨分化的影响。研究指出，重组腺病毒介导BMP-9及EPO基因均可转染ADSCs并稳定表达，双基因共转染后能显著促进成骨相关基因和蛋白的表达。该文发表在201
近期，山东济宁188体育平台论坛 医院188体育平台论坛 颌面外科研究人员发表论文，旨在探讨重组腺病毒介导BMP-9及促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）双基因共转染对脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）体外成骨分化的影响。研究指出，重组腺病毒介导BMP-9及EPO基因均可转染ADSCs并稳定表达，双基因共转染后能显著促进成骨相关基因和蛋白的表达。该文发表在2016年第03期《中国修复重建外科杂志》上。
取4月龄新西兰兔腹股沟脂肪组织，采用酶消化法与贴壁法分离培养ADSCs并鉴定其多向分化能力。将第3代ADSCs分为5组：A组为正常细胞，B组为空质粒转染细胞作为对照，C、D组分别采用BMP-9、EPO重组腺病毒转染细胞，E组采用BMP-9、EPO重组腺病毒共转染细胞。转染培养7 d后倒置相差显微镜观察各组细胞生长变化；计算48 h时病毒转染效率，14 d荧光显微镜下观察各组细胞荧光表达情况；14 d时Western blot检测各组细胞BMP-9及EPO蛋白表达。取转染培养14 d的5组细胞进行成骨诱导培养，于诱导培养3、7、14 d检测各组细胞ALP活性；3周时茜素红染色观察钙结节形成情况，实时荧光定量PCR检测骨桥蛋白（osteopontin，OPN）、骨钙素（osteocalcin，OCN）基因表达。
结果显示， 转染培养7 d后倒置相差显微镜下见A、B组部分细胞变为椭圆形、圆形和不规则形；C、D组可见少量长梭形细胞；E组长梭形细胞明显增多，仅见少量圆形细胞。荧光显微镜下观察BMP-9、EPO及BMP-9/EPO重组腺病毒均能稳定转染ADSCs，转染效率为80%～93%。Western blot检测示E组BMP-9及EPO蛋白相对表达量显著高于其他组，差异有统计学意义（P<0.05）。成骨诱导培养3、7、14 d时各组细胞ALP活性明显升高，E组优于其余各组（P<0.05）；3周时茜素红染色示E组钙结节数亦显著高于其余各组（P<0.05），实时荧光定量PCR示E组OPN和OCN基因相对表达量明显高于其他组，C、D组高于A、B组，比较差异有统计学意义（P<0.05）。
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