体外诱导人羊膜间充质干细胞向韧带细胞分化的实验研究
近期，遵义医学院附属医院骨科研究人员发表论文，旨在探讨人羊膜间充质干细胞（humanamnioticmesenchymalstemcells，hAMSCs）是否具有MSCs的特性及经诱导后在体外能否向韧带细胞分化。研究指出，hAMSCs具有MSCs的特性，有良好增殖能力，经体外诱导后韧带特异性基因表达上调，韧带特异性蛋白合成增加，可作为韧带组织工程种子细胞来源之一。该文发表在2016年第02
近期，遵义医学院附属医院骨科研究人员发表论文，旨在探讨人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells，h AMSCs）是否具有MSCs的特性及经诱导后在体外能否向韧带细胞分化。研究指出，h AMSCs具有MSCs的特性，有良好增殖能力，经体外诱导后韧带特异性基因表达上调，韧带特异性蛋白合成增加，可作为韧带组织工程种子细胞来源之一。该文发表在2016年第02期《中国修复重建外科杂志》上。
取产妇胎盘通过酶消化法获得h AMSCs，流式细胞术鉴定h AMSCs表型特征。取第3代h AMSCs分别加入含不同诱导液的L-DMEM/F12培养基：A组TGF-β1+b FGF，B组透明质酸（hyaluronic acid，HA），C组TGF-β1+b FGF+HA，D组为空白对照组。倒置相差显微镜观察诱导后21 d各组细胞形态学变化；磺酰罗丹明B（sulforhodamine B，SRB）比色法检测各组细胞生长活性；诱导后7、14、21 d分别采用免疫组织化学染色及实时荧光定量PCR检测韧带特异性蛋白和基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、肌腱蛋白C（tenascin C，TNC）表达。
结果显示， 流式细胞术鉴定结果表明h AMSCs表达MSCs表型。倒置相差显微镜观察示诱导21 d A、B、C组细胞均呈长梭形纤维细胞样生长，C组细胞形态更单一、有明显方向性且较A组排列更紧凑。SRB比色法检测示各组细胞于培养6 d左右达增殖高峰，6 d时A、B、C组细胞活性均显著高于D组。免疫组织化学结果示：诱导培养7 d，各组均未检测到TNC表达；7、14、21 d A、B、C组Ⅰ型胶原表达均显著高于D组，14、21 d A、B、C组Ⅲ型胶原表达显著高于D组，差异均有统计学意义（P<0.001）。B组Ⅰ型胶原表达以及A、C组Ⅲ型胶原、TNC表达随时间增加均呈逐渐增高趋势，各时间点间比较差异均有统计学意义（P<0.001）。实时荧光定量PCR结果示：诱导培养21 d，C组Ⅰ型胶原、TNC m RNA相对表达量显著高于A、B组，B组Ⅲ型胶原m RNA相对表达量显著高于A、C组，差异均有统计学意义（P<0.05）。A、C组Ⅰ型胶原、TNC以及C组Ⅲ型胶原m RNA相对表达量随时间增加呈逐渐上调趋势，各时间点间比较差异均有统计学意义（P<0.001）。
相关文章
评论
我要跟帖
